1.?需檢查的供試品如在分裝后?24?小時以內(nèi)進行支原體檢查者可貯存于?2~8℃;超過24?小時應(yīng)置-20℃以下貯存。
2.?檢查支原體采用支原體肉湯培養(yǎng)基和支原體半流體培養(yǎng)基。半流體培養(yǎng)基在使用前應(yīng)煮沸10~15?分鐘,冷卻至?56℃左右,然后加入滅能小牛血清(培養(yǎng)基:血清比例為?8:2;也可使用經(jīng)驗證過的其它血清),并可根據(jù)需求加入適量青霉素,充分搖勻。肉湯培養(yǎng)基除無需煮沸外,使用前需同樣補加上述成分。
3.?取每支裝量?10 ml(含?2ml?血清)的支原體肉湯培養(yǎng)基各?4?支、相應(yīng)的支原體半流體培養(yǎng)基各?2?支(已冷至?36℃±1℃),每支培養(yǎng)基接種供試品?0.5~1.0 ml,置?36℃±1℃培養(yǎng)?21天。于接種后的第?7?天從?4?支支原體肉湯培養(yǎng)基中各取?2?支進行次代培養(yǎng),每支培養(yǎng)基分別轉(zhuǎn)種至相應(yīng)的支原體半流體培養(yǎng)基及支原體肉湯培養(yǎng)基各?2?支,置?36℃±1℃培養(yǎng)?21?天,每隔?3?天觀察?1?次。
4.?結(jié)果觀察:培養(yǎng)結(jié)束后,如接種供試品的培養(yǎng)基均無支原體生長,則供試品判為合格;如疑有支原體生長,可取加倍量供試品復(fù)試,如無支原體生長,供試品判為合格,如仍有支原體生長,則供試品判為不合格。?