1.?需檢查的供試品如在分裝后?24?小時以內進行支原體檢查者可貯存于?2~8℃;超過24?小時應置-20℃以下貯存。
2.?檢查支原體采用支原體肉湯培養基和支原體半流體培養基。半流體培養基在使用前應煮沸10~15?分鐘,冷卻至?56℃左右,然后加入滅能小牛血清(培養基:血清比例為?8:2;也可使用經驗證過的其它血清),并可根據需求加入適量青霉素,充分搖勻。肉湯培養基除無需煮沸外,使用前需同樣補加上述成分。
3.?取每支裝量?10 ml(含?2ml?血清)的支原體肉湯培養基各?4?支、相應的支原體半流體培養基各?2?支(已冷至?36℃±1℃),每支培養基接種供試品?0.5~1.0 ml,置?36℃±1℃培養?21天。于接種后的第?7?天從?4?支支原體肉湯培養基中各取?2?支進行次代培養,每支培養基分別轉種至相應的支原體半流體培養基及支原體肉湯培養基各?2?支,置?36℃±1℃培養?21?天,每隔?3?天觀察?1?次。
4. 結果觀察:培養結束后,如接種供試品的培養基均無支原體生長,則供試品判為合格;如疑有支原體生長,可取加倍量供試品復試,如無支原體生長,供試品判為合格,如仍有支原體生長,則供試品判為不合格。?